Главная > Ветеринария > Гепатит, парвовирус, чума плотоядных

Гепатит, парвовирус, чума плотоядных

Гепатит, парвовирус, чума плотоядных

Гепатит, Парвовирус, Чума плотоядных

 

Набор для диагностики

IgG Инфекционного Гепатита, Парвовируса и Чумы Плотоядных

ИммуноКомб® 


I. НАЗНАЧЕНИЕ

Этот набор предназначен для определения титра антител сыворотки собак к Инфекционному Гепатиту Собак (ИГС), Парвовирусу Собак (ПВС) и Вирусу Чумы Плотоядных (ВЧП). Основной целью данного комплекта является обеспечение полезными инструментами для оценки иммунного статуса собак касательно этих патогенов. Он может определить титр IgG до и после вакцинации или на протяжении иммунности.

 

II. ОБЩАЯ ИНФОРМАЦИЯ

Инфекционный Гепатит Собак (ИГС), Парвовирус Собак (ПВС) и Вирус Чумы Плотоядных (ВЧП) являются важными причинами заболеваемости и смертности у собак. Щенки в наибольшей степени подвержены ИГС, ПВС и ВЧП, особенно после отлучения, когда уровень защитных материнских антител (ЗМА) снижается. Иногда ЗМА могут скрещиваться с вакцинациями, которые даются для иммунизации.

Таким образом, ИГС, ПВС и ВЧП становят большую клиническую проблему среди ветеринаров во всем мире и по-прежнему представляют проблему в диагностике.

 III. ЧТО ТКОЕ АНАЛИЗ ИММУНОКОМБ®?

Тест ИммуноКомб®  являет собой измененный тест ELISA, который можно описать как фермент маркированный "точка анализа", что определяет уровень антител в сыворотке или цельной крови.

Комплект содержит все необходимые реагенты для проведения теста. Результаты анализа IgG ИГС, ПВС и ВЧП получают на протяжении 25 минут.

 IV. КАК РАБОТАЕТ ИММУНОКОМБ®?

■ Комплект ИммуноКомб® состоит из 2 основных компонентов: гребнеобразной пластиковой карты (в дальнейшем – Гребень) и многокамерной проявочной ванны.

■ Гребень имеет 12 зубцов – достаточно для 12 тестов. Каждый зубец будет развиваться в соответствующей колонке лунки в проявочной ванне. Индивидуальные или общие тесты обрабатываются путем разрыва нужного количества зубцов Гребня.

■ Диагностические точки ИГС, ПВС и ВЧП прикрепляются к каждому зубцу Гребня. Верхняя точка – это Положительный Контроль. Очищенный антиген АВС (для диагностики ИГС) прикрепляется в верхней средней точке, очищенный антиген ПВС – в нижней средней точке и очищенный антиген ВЧП – в нижних 4х точках (см. рис. в разделе Х).

■ Возьмите образцы сыворотки, плазмы или цельной крови. Внесите их в лунку  Ряда А многокамерной проявочной ванны.

■ Далее гребень вставьте в лунку (и) с образцом (ами) и перемещайте в следующие лунки (B-F) при синхронизированных интервалах, в соответствии с инструкцией (см. ниже). Специфические антитела IgG в образце, если они имеются, связываются с антигеном на диагностических точках.

■ Гребень переместите в следующую лунку (Ряд B), где не связанные антитела вымыты.

■ Вставьте Гребень в следующую лунку (Ряд C), в которой содержится анти-собачье антитело IgG, меченное ферментом, которое будет связывать комплексы антиген-антитело на диагностических точках.

■ После еще 2 промываний (Ряды D и E) Гребень переместите в следующую лунку (Ряд F), где цвет результата развивается через ферментативную реакцию.

■ Интенсивность цвета в результате соответствует уровню антител в исследуемом образце. Результаты оцениваются по шкале точек Положительного Контроля и Шкале Гребня (см. раздел IX).

 V. ОПИСАНИЕ БОЛЕЗНИ

ИГС

Инфекционный гепатит собак – это заболевание, которое вызывается аденовирусом собак (AВС). Заражение происходит при непосредственном контакте с инфицированными собаками или на территориях, контаминированных вирусом. Первый признак – это кашель, который может перейти в воспаление легких. Позже, когда вирус попадает в кровь, печень, почки и другие органы, он может вызвать клинические признаки, такие как: "голубой глаз", рвота, диарея, повышенная жажда и судороги. Щенки имеют самый высокий процент смертности.

ПВС

Инфекция Парвовируса Собак распространяется с помощью воздействия загрязненной среды. Клинические признаки ПВС – это летаргия, депрессия, отсутствие аппетита, лихорадка, рвота и понос (иногда с кровью). Смертность высока у щенков.

ВЧП

Вирус Чумы Плотоядных передается от собаки к собаке аэрозольным путем. Природное заражение ВЧП может вызвать кратковременную лихорадку, которая иногда может пройти незамеченной. В отдельных случаях, когда болезнь развивается, она характеризуется перемежающейся лихорадкой, депрессией, вытеканиями из глаз и носовой полости, анорексией. Респираторные признаки и признаки желудочно-кишечного тракта тоже могут проявляться. У многих (но не всех) собак, что переживают острую стадию заболевания, будут развиваться симптомы нарушения центральной нервной системы (ЦНС), в том числе воспаление зрительного нерва и поражение сетчатки. Наиболее известные признаки ЦНС – это атаксия, парезы и судороги.

 VI. ДИАГНОЗ

Ветеринары обычно делают предполагаемый диагноз ИГС, ПВС и ВЧП на основании клинических признаков.

Лабораторные тесты могут быть полезны для подтверждения диагноза. В дополнение к гематологии и химии крови, серология получает все более широкое признание диагностического инструмента.

Серология обеспечивает более широкую картину в иммунологическом статусе собаки. Гуморальный иммунный ответ, в основном состоит из 2 классов иммуноглобулинов (антител), IgM и IgG. В первые дни после заражения или вакцинации, антитела IgM вырабатываются в больших количествах. Позже, титры IgM снижаются, в то время как уровень IgG увеличивается. Таким образом, у собак, которые способны укрепить иммунный ответ, повышенный уровень IgM свидетельствует о недавнем заражении. Отсутствие антител IgM при повышенном титре IgG позволяет предположить, что контакт с вирусом происходил раньше, а в настоящее время собака иммунная. Повышенные уровни IgG, как правило, проявляются у собак, что переживают острую фазу заболевания, или после вакцинации (рис. 1).

 Рис. 1. Уровни антител к ИГС, ПВС и ВЧП у здоровых собак после вакцинации

 VII. ПОСЛЕДОВАТЕЛЬНОСТЬ ПОСТАНОВКИ РЕАКЦИИ ИММУНОКОМБ®

 Проводите анализ при комнатной температуре 20-25°C (68-77°F).

 (1) Получите образец крови собаки.

 (2) Используйте пипетки или капилляры (Комплект из 40 капилляров и 1 поршня можете купить при потребности). В случае тестирования сыворотки или плазмы используйте 5 мкл исследуемого образца сыворотки или плазмы, или 10 мкл крови.

 (3) Разрежьте защитную алюминиевую фольгу лунки А с помощью пинцета. Используйте одну лунку для каждого образца.

 (4) Поместите образец в лунку Ряда А. Поднимите и опустите поршень несколько раз для перемешивания.

 Не открывайте все лунки ряда А или других рядов, которые вы не собираетесь использовать.

 (5) Выньте Гребень из защитной оболочки. Для диагностики менее 12 образцов, разрежьте или переломите Гребень, перегибая по распределенным меткам на количество требуемых тестов. Вставьте Гребень в открытую лунку (и) в ряде А (напечатанной стороной к себе) и выдерживайте в течение 5 минут. Для перемешивания аккуратно подвигайте Гребнем вверх и вниз перед началом каждой инкубации (каждый ряд). Повторите это движение минимум дважды во всех оставшихся рядах.

 (6) Используйте пинцет для прокалывания фольги следующей лунки (ряд B), и вставьте Гребень на 2 минуты. Перед перемещением Гребня из одной лунки в другую, проткните фольгу следующей лунки. Аккуратно избавьтесь от лишней жидкости из зубца Гребня. Вставьте Гребень в следующую лунку (ряд C) на 5 минут. Переместите Гребень в оставшиеся лунки (ряды D и E) на 2 минуты, а в последнюю лунку (ряд F) на 5 минут.

 (7) По завершении возникновения цвета в ряде F переместите Гребень в ряд E на 2 минуты для фиксации цвета. Извлеките гребень и дайте ему высохнуть 1-10 минут.

 VIII. ЧТЕНИЕ И ИНТЕРПРЕТАЦИЯ РЕЗУЛЬТАТОВ АНТИТЕЛ IgG

■ Верхняя точка – точка Положительного Контроля, что должна дать особый пурпурно-серый цвет. Это тот же тон цвета, который создается в результате существенного положительного ответа  на антитела ИГС при титре 1:40 V.N., антитела ПВС при титре 1:80 Н.I. или антитела ВЧП при титре 1:80 V.N. При использовании Шкалы Гребня эта точка должна читаться как S3 (см. раздел IX).

■ Верхняя средняя точка на Гребне дает результаты антител IgG ИГС в образце.

■ Нижняя средняя точка на Гребне дает результаты антител IgG ПВС в образце.

■ Нижняя точка на Гребне дает результаты антител IgG ВЧП в образце.

■ Сравните цветовой тон диагностических точек ИГС, ПВС и ВЧП с точкой Положительного Контроля (отдельно).

■ Тон цвета, что является эквивалентным или темнее контрольной точки считается положительным ответом.

■ Цвет слабее тона S1 или меньше, считается отрицательным результатом.

■ Для оценки подсчета антител используйте Шкалу Гребня, которая  предоставлена в комплекте (см. раздел IX).

 IX. СЧИТЫВАНИЕ РЕЗУЛЬТАТОВ ПО ШКАЛЕ ГРЕБНЯ

Значение S на Шкале Гребня – это число, что появляется в желтом окне в соответствии тону цвета, когда цвет Положительного Контроля откалиброван до S3.

 Когда Гребень полностью высохнет, откалибруйте его с цветом Шкалы Гребня, которая предоставляется в комплекте. Найдите на Шкале Гребня пурпурно-серый тон, который наиболее близко соответствует точке Положительного Контроля (верхняя точка). Двигайте желтую линейку пока в окне не появится соответствие С .

Держите слайд в таком положении на протяжении всего чтения. Этот шаг фактически калибрует C на S3, что является "отрезанной" точкой, которая будет сравниваться с точками контроля.

 Удерживая слайд, найдите пурпурно-серый тон на Шкале Гребня, который наиболее близко соответствует точке результата (одна с нижних точек). Число, которое появится в окне выше – это Шкала Гребня (S0-S6). Повторите этот шаг с каждой диагностической точкой отдельно.

 X. ПРИМЕР ПРОЯВЛЕННОГО ГРЕБНЯ

 

№ зубца

Результаты на Вирус Инфекционного Гепатита

Результаты на Парвовирус

Результаты на Вирус Чумы

1

S0

Отрицательный

≥S5

Высоко положительный

<S1

Отрицательный

2

S4

Положительный

S0

Отрицательный

S6

Высоко положительный

3

≥S5

Высоко положительный

≥S5

Высоко положительный

≥S5

Высоко положительный

4

S0

Отрицательный

S0

Отрицательный

S0

Отрицательный

5

≥S3

Положительный

S0

Отрицательный

S1-2

Неадекватная иммунность

6

S0

Отрицательный

S1-2

Неадекватная иммунность

S4

Положительный

7

S1-2

Неадекватная иммунность

≥S5

Высоко положительный

S0

Отрицательный

8*

 

Больной

 

Больной

 

Больной

9**

 

Больной

 

Больной

 

Больной

10

<S1

Отрицательный

S0

Отрицательный

≥S5

Высоко положительный

11

≥S3

Положительный

≥S3

Положительный

≥S3

Положительный

12***

≥S3

Положительный

≥S3

Положительный

≥S3

Положительный

 

Примечания:

* Нет Положительного Контроля. Повторите тест.

** Высокий цветовой фон. Повторите тест.

*** Высокий цветовой фон с положительными результатами.

 

Другой способ чтения результатов с помощью КомбСкан. Это программа использует компьютер и ДВА совместимых сканера. Когда гребень находится на сканере, программа переводит цветовые результаты в числовые значения. КомбСкан помогает лабораториям при чтении результатов ИммуноКомб® и сохранении данных, а также поставляется бесплатно по запросу.

 

XI. МЕРЫ ПРЕДОСТОРОЖНОСТИ И УСЛОВИЯ ХРАНЕНИЯ

1. Хранить при температуре 2-8 ° C (36-46 °F). Не замораживать.

2. Перед проведением испытаний все компоненты набора и исследуемые образцы должны быть комнатной температуры. Ставить реакцию необходимо при комнатной температуре 20-25 ° C (68-77 °F).

3. Избегайте утечки и перекрестногоконтаимнирования раствора.

4. Смешивайте реагенты путем обращения проявочной ванны несколько раз перед использованием.

5. Не смешивать реагенты из разных наборов или разных лунок одного комплекта.

6. Не дотрагивайтесь до зубцов картки ИммуноКомб® руками.

7. При использовании проявочной ванны, проколите покрытие каждой лунки, строго следуя инструкциям диагностикума. Не снимайте и не перемещайте покрытие проявочных ванн все сразу.

8. Диагностический набор содержит инактивированный биологический материал.

 XII. СОДЕРЖИМОЕ КОМПЛЕКТА

 

Компоненты

12 наборов тестов  (50CVV101)

120 наборов тестов  (50CVV110)

А. Карта ИммуноКомб®  (в алюминиевой оболочке)

1

10

B. Проявочная ванна

1

10

C. Одноразовый пинцет

1

1

D.  Калибровочная  Шкала Гребня

1

1

Е. 12 капилляров и один поршень

1

Можно купить по заказу

Инструкция

1

1

 

 

 

 

 

 

ХIII. ЛИТЕРАТУРА

AAHA Vaccine Task Force. (2006). JAAHA, 42, 80-89.

Dudley et al. (1998). JAVMA, 213(1), 72-75.

Pollock & Carmichael. (1982). JAVMA, 180(1), 37-42.

Waner et al. (2006). J. Vet Dia. Invest., 18(3), 267-270.

 

Для дальнейшей помощи, пожалуйста, свяжитесь с вашим местным дистрибьютором, или Biogal Galed Laboratories, прямо по электронной почте: info(at)biogal.co.il или по телефону 972-4-9898605 / факсу 972-4-9898690.

 

 

 

 

 
Украина, Киев E-mail: zamok-shust33@mail.ru
free counters