Главная > Ветеринария > Лептоспироз собак

Лептоспироз собак

Лептоспироз собак

НАБОР ДЛЯ ДИАГНОСТИКИ  (лептоспироз)

Набор для диагностики

Лептоспироза Собак

ИммуноКомб®


I. НАЗНАЧЕНИЕ

Этот комплект предназначен для определения титров антител сыворотки собак к разным патогенным сероварам Leptospira interrogans. Смесь антигенов: L.icterohaemorrhagiae (copenhageni и RGA), L.canicola, L.pomona и L.grippotyphosa, связывают антитела с наиболее распространенными вариантами, найденными у собак. Положительный результат свидетельствует о текущей инфекции. Комплект НЕ предназначен для различий конкретных серотипов.

 

II. ОБЩАЯ ИНФОРМАЦИЯ

Лептоспироз – это спирохетная болезнь, которая распространена во всем мире у различных видов животных. Различные серовары Leptospira interrogans сохраняются в природе в многочисленных субклинически инфицированных диких и домашних животных (резервуарные хозяева). Резервуарные хозяева являются источником инфекции для людей и других случайных хозяев. Собачья инфекция наблюдается в основном в охотничьих и спортивных собак, которые едят диких животных, собак, имеющих доступ к лесистой местности с берегами рек или болот. Стоячая вода является естественной средой для Лептоспир. Контаминация происходит через прямой контакт с загрязненной мочой, трансплацентарным и венерическим путем. Косвенное заражение возможно также через контаминированную воду, растения, почву и продукты питания. Leptospira не размножается вне хозяина и их выживание зависит от экологических условий, в которых они находятся. Leptospira чувствительна к высушиванию, а также изменение рН может иметь пагубные последствия. Более высокая заражаемость Лептоспирозом прослеживается во время сезона дождей, когда есть изобилие стоячей воды и болотистые условия.

При борьбе с этим заболеванием были разработаны программы вакцинации. Тем не менее, вакцина не всегда содержит соответствующие серовары, а длительность иммунитета очень короткая (6-7 месяцев).

 

III. ЧТО ТАКОЕ ИММУНОКОМБ®?

Тест ИммуноКомб®  являет собой измененный тест ELISA, который был описан как фермент маркированный "точка анализа", что определяет уровень антител в сыворотке или цельной крови. Комплект содержит все необходимые реагенты для проведения теста. Результаты анализа Лептоспироза собак получают на протяжении 20 минут.

 

IV. КАК РАБОТАЕТ ИММУНОКОМБ®?

■ Комплект ИммуноКомб® состоит из 2 основных компонентов, гребнеобразной пластиковой карты (в дальнейшем – Гребень) и многокамерной проявочной ванны.

■ Гребень имеет 12 зубцов – достаточно для 12 тестов. Каждый зубец будет развиваться в соответствующей колонке лунки в проявочной ванне. Индивидуальные или общие тесты обрабатываются путем разрыва нужного количества зубцов Гребня.

■ Диагностическая точка смешанных сероваров Лептоспиры связывается на нижней точке каждого зубца Гребня. Верхняя точка – это положительный контроль.

■ Возьмите образцы сыворотки, плазмы или цельной крови. Внесите их в лунку  Ряда А многокамерной проявочной ванны.

■ Далее гребень вставьте в лунку (и) с образцом (ами) и перемещайте в следующие лунки (B-F) при синхронизированных интервалах, в соответствии с инструкциями. Специфические антитела IgG в образце, если они имеются, связываются с антигеном на диагностических точках.

■ Гребень переместите в следующую лунку (Ряд B), где не связанные антитела вымыты.

■ Вставьте Гребень в следующую лунку (Ряд C), в которой содержится анти-собачье антитело IgG, меченное ферментом, которое будет связывать комплексы антиген-антитело на диагностических точках.

■ После еще 2 промываний (Ряды D и E) Гребень переместите к следующую лунку (Ряд F), где цвет результата развивается через ферментативную реакцию.

■ Интенсивность цвета в результате соответствует уровню антител в исследуемом образце. Результаты оцениваются по шкале точек положительного контроля и Шкале Гребня.

 

V. КЛИНИЧЕСКИЕ ПРИЗНАКИ

Собачье заболевание проявляется как острое воспаление почек и печени, и даже как сепсис. Хроническая болезнь почек является общим проявлением инфекции. Аборты могут возникнуть у беременных сук. Распространение Лептоспироза у собак может быть недооцененным из-за бессимптомной инфекции.

 

VI. ДИАГНОЗ

Диагноз собачьего Лептоспироза во многом основывается на клинических признаках. Серологические тестирования используют при постановке диагноза. Микроскопический Анализ Агглютинации (МАА) является стандартным лабораторным методом серологического диагноза Лептоспироза. Четырехразовое повышение титра антител к сероварам Leptospira считается значительным. Часто можна увидеть повышенные титры на несколько сероваров благодаря кросс-реакциям. Если есть положительные кросс-реакции сероваров с самыми высокими титрами, они считаются наиболее значимыми. ИммуноКомб® Biogal, которая основана на "точка"-ELISA технологии, есть более чувствительный, чем MAА, но она еще не различает конкретного серотипа. Набор для диагностики Собачьего Лептоспироза ИммуноКомб® является испытательным комплектом, предназначенным для оценки титров антител к L.canicola, L. icterohaemorrhagiae, L.grippotyphosa и сероваров L.pomona.

 

Рис. 1. Соотношение между значением "S" Шкалы Гребня™ и титра M. А. A.

 

 

VII. ПОСЛЕДОВАТЕЛЬНОСТЬ ПОСТАНОВКИ РЕАКЦИИ ИММУНОКОМБ®

 

Проводите анализ при комнатной температуре 20-25°C (68-77°F).

 

 

(1) Получите образец крови собаки.

 

 

(2) Разрежьте защитную алюминиевую фольгу лунки А* с помощью пинцета. Используйте одну лунку для каждого образца.

 

 

 

(3) Используйте пипетки или капилляры. В случае тестирования сыворотки или плазмы используйте 5 мкл исследуемого образца сыворотки или плазмы, или 10 мкл крови.

 

 

(4) Поместите образец в лунку Ряда А*. Поднимите и опустите поршень несколько раз для перемешивания.

 

Не открывайте все лунки ряда А* или других рядов, которые вы не собираетесь использовать.

 

 

(5) Выньте Гребень из защитной обертки. Для диагностики менее 12 образцов, разрежьте или перегните Гребень по распределенным меткам на количество требуемых тестов. Вставьте Гребень в открытую лунку (и) в ряде А* (напечатанной стороной к себе) и выдерживайте в течение 5 минут. Для перемешивания аккуратно подвигайте Гребнем вверх и вниз. Повторите это движение минимум дважды во всех оставшихся рядах.

 

 

(6) Используйте пинцет для прокалывания фольги следующей лунки (ряд B*), и вставьте Гребень на 2 минуты. Перед перемещением Гребня из одной лунки в другую, проткните фольгу следующей лунки и аккуратно избавьтесь от лишней жидкости из зубцов Гребня. Вставьте Гребень в следующую лунку (ряд C*) на 5 минут.

Переместите Гребень в оставшиеся лунки (ряды D* и E*) на 2 минуты, а в последнюю лунку (ряд F*) на 5 минут.

 

 

(7) По завершении возникновения цвета в ряде F* переместите Гребень в ряд E* на 2 минуты для фиксации цвета. Извлеките гребень и дайте ему высохнуть.

 

* См. рис.2.

 

VIII. ЧТЕНИЕ И ИНТЕРПРЕТАЦИЯ РЕЗУЛЬТАТОВ АНТИТЕЛ IgG

■ Верхняя точка должна дать особый серый цвет. Это тот же тон цвета, который создается в результате существенного положительного ответа IgG. Эту точку следует рассматривать как S3 на шкале от S0 до S6. (S3 считается "отсечкой" уровня антител IgG, что равно положительному иммунному ответу при титре 1:400 Микроскопического Анализа Агглютинации – MAА). См. рис. 1.

■ Нижняя точка на Гребне дает результаты реакции смешанных сероваров Лептоспиры антител IgG. Сравните цветовой тон точки смешанных сероваров Лептоспиры (нижняя) с точкой положительного контроля (верхняя). Четкая серая точка указывает на положительный ответ. Результат темнее, чем позитивный контроль указывает на высший титр. Цвет слабее, чем положительный контроль указывает на низкий ответ, который равен титру МАА от 1:100 до 1:200.

■ Для оценки титра используйте Шкалу Гребня, которая  предоставлена в комплекте.

 

IX. СЧИТЫВАНИЕ РЕЗУЛЬТАТОВ ПО ШКАЛЕ ГРЕБНЯ

 

 

(1) Соответствие “С ” с положительным контролем: Когда Гребень полностью высохнет, откалибруйте его с цветом Шкалы Гребня. Сравните точку положительного контроля (верхняя точка) c цветом шкалы, двигая желтую линейку пока в окне не появится знак С , в соответствии цветового тона точке положительного контроля. Держите линейку в таком положении на протяжении чтения. Это калибрует C на S3.

 

 

(2) Соответствие цвета шкалы результатам диагностики: Найдите серый тон на Шкале Гребня, который наиболее близко соответствует точке положительного контроля (нижняя точка). Число, которое появится в окне выше – это “шкала” Гребня (S1-S6).

 

X. ПРИМЕР ПРОЯВЛЕННОГО ГРЕБНЯ

 

 

№ ЗУБЦА

РЕЗУЛЬТАТЫ

ПРИМЕЧАНИЯ

1, 12

Отрицательный результат на Лептоспиру.

отрицательный

2, 4

Высокая положительная реакция на Лептоспиру.

S 5-6

3, 5

Низкая положительная реакция на Лептоспиру.

S 1-2

6, 11

Положительная реакция на Лептоспиру.

S 3-4

7, 8

Нет положительного контроля – реакция не удалась.

неправильный

9

Высокие фоновые цвета – скрещивание со считыванием.

неправильный

10

Положительная реакция с высоким фоном.

положительный

 

Другой способ чтения результатов с помощью КомбСкан2000. Это программа использует компьютер и два совместимых сканера. Когда гребень находится на сканере, программа переводит цветовые результаты в числовые значения. КомбСкан2000 помогает лабораториям при чтении результатов ИммуноКомб® и сохранении данных, а также поставляется бесплатно по запросу.

 

Для дальнейшей помощи, пожалуйста, свяжитесь с вашим местным дистрибьютором, или Biogal Galed Laboratories, прямо по электронной почте: info(at)biogal.co.il или по телефону 972-4-9898605 / факсу 972-4-9898690.

 

XI. МЕРЫ ПРЕДОСТОРОЖНОСТИ И УСЛОВИЯ ХРАНЕНИЯ

1. Хранить при температуре 2-8 ° C (36-46 °F). Не замораживать.

2. Перед проведением испытаний все компоненты набора и исследуемые образцы должны быть комнатной температуры. Ставить реакцию необходимо при комнатной температуре 20-25 ° C (68-77 °F).

3. Избегайте утечки и перекрестного контаминирования раствора.

4. Смешивайте реагенты путем обращения проявочной ванны несколько раз перед использованием.

5. Не смешивать реагенты из разных наборов или разных лунок одного комплекта.

6. Не дотрагивайтесь до зубцов картки ИммуноКомб® руками.

7. При использовании проявочной ванны, проколите покрытие каждой лунки, строго следуя инструкциям диагностикума. Не снимайте и не перемещайте покрытие проявочных ванн все сразу.

8. Диагностический набор содержит инактивированный биологический материал.

 

XII. СОДЕРЖИМОЕ КОМПЛЕКТА

 

Компонент

12 наборов тестов  Кат. 50CLC201

120 наборов тестов  Кат. 50CLC210

А. Карта ИммуноКомб®  (в алюминиевой оболочке)

1

10

B. Проявочная ванна*

1

10

C. Одноразовый пинцет

1

1

D.  Калибровочная  цветная карта Шкала Гребня

1

1

Е. 12 капилляров и один поршень

1

-

Инструкция

1

1

 

 

 

 

 

 

 

 

* Проявочная ванна показана ниже.

 

Рис.2

 

 

ХIII. ЛИТЕРАТУРА

 

1). Noel R. (2002). An overview of canine leptospirosis. HYPERLINK "http://www.vet.uga.edu/vpp/clerk/noel/" http://www.vet.uga.edu/vpp/clerk/noel/.

2).  McDonough, PL. (2001). Leptospirosis in dogs-current status, Recent Advances in Canine Infectious Diseases. International Veterinary Information Services, July. HYPERLINK "http://www.ivis.org/" www.ivis.org

3). Levett, P. Leptospirosis. (2001). Clinical Microbial Reviews, 14(2), 296-326.

 
Украина, Киев E-mail: zamok-shust33@mail.ru
free counters